Providing inoculum for Didymella bryoniae studies: the effect of light spectrum and storing at low temperature

Abstract The in vitro sporulation of Didymella bryoniae is of great importance for studies that require pure inoculum and in large quantities. Thus, the objectives of this study were to identify the best condition for D. bryoniae sporulation combining different light spectra (UV-A or UV-B light, white light, and continuous dark), with distinct culture media (PDA, V8, ML, and PDAB) and, to evaluate fungus survivability stored at -20°C over time. The fungus samples were only able to sporulate when subjected to the UV-B light treatment, regardless of the culture medium. The highest appearance of spores conidium type was observed in the PDAB medium, and the lowest production occurred in the ML medium. Reproductive structures, such as perithecia and pycnidia, were observed in all culture media. However, there was considerable variation in the amount of each structure between the different culture media. The ML and V8 media showed a greater number of perithecia and the PDA and PDAB media presented a greater proportion of pycnidia compared to perithecia. The storage duration at -20°C did not affect mycelial growth or mycelial growth rate. In conclusion, the UV-B light is essential for D. bryoniae in vitro sporulation. Moreover, the culture medium composition influences the type of fungal structure produced, as well as spores size and quantity. Freezing at -20°C is an efficient technique that can be used to store D. bryoniae for at least five months without loss of viability.

Resumo A esporulação de Didymella bryoniae in vitro é de grande importância para estudos que requerem inóculo puro e em grandes quantidades. Assim, os objetivos deste estudo foram identificar a melhor condição para esporulação de D. bryoniae combinando diferentes espectros de luz (luz UV-A ou UV-B, luz branca e escuro contínuo) com distintos meios de cultura (PDA, V8, ML e PDAB) e, avaliar a sobrevivência do fungo armazenado a -20°C ao longo do tempo. As amostras de fungo só esporularam quando submetidas ao tratamento com luz UV-B, independentemente do meio de cultura. Maior aparecimento de esporos do tipo conídio foi observado no meio PDAB, e a menor produção ocorreu no meio ML. Estruturas reprodutivas, como peritécios e picnídeos, foram observadas em todos os meios de cultura. No entanto, houve uma variação considerável na quantidade de cada estrutura entre os diferentes meios de cultura. Os meios ML e V8 apresentaram maior número de peritécios e os meios PDA e PDAB apresentaram maior proporção de picnídeos em relação aos peritécios. A duração do armazenamento a -20°C não afetou o crescimento micelial ou a taxa de crescimento micelial. Em conclusão, a luz UV-B é essencial para a esporulação de D. bryoniae in vitro. Além disso, a composição do meio de cultura influencia o tipo de estrutura fúngica produzida, bem como o tamanho e a quantidade dos esporos. O congelamento a -20°C é uma técnica eficiente que pode ser usada para armazenar D. bryoniae por pelo menos cinco meses sem perda de viabilidade

Providing inoculum for Didymella bryoniae studies: the effect of light spectrum and storing at low temperature / Fornecendo inóculo para estudos de Didymella bryoniae: o efeito do espectro de luz e armazenamento em baixa temperatura

Abstract The in vitro sporulation of Didymella bryoniae is of great importance for studies that require pure inoculum and in large quantities. Thus, the objectives of this study were to identify the best condition for D. bryoniae sporulation combining different light spectra (UV-A or UV-B light, white light, and continuous dark), with distinct culture media (PDA, V8, ML, and PDAB) and, to evaluate fungus' survivability stored at -20°C over time. The fungus samples were only able to sporulate when subjected to the UV-B light treatment, regardless of the culture medium. The highest appearance of spores conidium type was observed in the PDAB medium, and the lowest production occurred in the ML medium. Reproductive structures, such as perithecia and pycnidia, were observed in all culture media. However, there was considerable variation in the amount of each structure between the different culture media. The ML and V8 media showed a greater number of perithecia and the PDA and PDAB media presented a greater proportion of pycnidia compared to perithecia. The storage duration at -20°C did not affect mycelial growth or mycelial growth rate. In conclusion, the UV-B light is essential for D. bryoniae in vitro sporulation. Moreover, the culture medium composition influences the type of fungal structure produced, as well as spores' size and quantity. Freezing at -20°C is an efficient technique that can be used to store D. bryoniae for at least five months without loss of viability.

Resumo A esporulação de Didymella bryoniae in vitro é de grande importância para estudos que requerem inóculo puro e em grandes quantidades. Assim, os objetivos deste estudo foram identificar a melhor condição para esporulação de D. bryoniae combinando diferentes espectros de luz (luz UV-A ou UV-B, luz branca e escuro contínuo) com distintos meios de cultura (PDA, V8, ML e PDAB) e, avaliar a sobrevivência do fungo armazenado a -20°C ao longo do tempo. As amostras de fungo só esporularam quando submetidas ao tratamento com luz UV-B, independentemente do meio de cultura. Maior aparecimento de esporos do tipo conídio foi observado no meio PDAB, e a menor produção ocorreu no meio ML. Estruturas reprodutivas, como peritécios e picnídeos, foram observadas em todos os meios de cultura. No entanto, houve uma variação considerável na quantidade de cada estrutura entre os diferentes meios de cultura. Os meios ML e V8 apresentaram maior número de peritécios e os meios PDA e PDAB apresentaram maior proporção de picnídeos em relação aos peritécios. A duração do armazenamento a -20°C não afetou o crescimento micelial ou a taxa de crescimento micelial. Em conclusão, a luz UV-B é essencial para a esporulação de D. bryoniae in vitro. Além disso, a composição do meio de cultura influencia o tipo de estrutura fúngica produzida, bem como o tamanho e a quantidade dos esporos. O congelamento a -20°C é uma técnica eficiente que pode ser usada para armazenar D. bryoniae por pelo menos cinco meses sem perda de viabilidade

Influência da concentração, do fotoperíodo e da temperatura de armazenamento na germinação de urediniósporos de Olivea tectonae / Influence of concentration, photoperiod and storage temperature in germination of Olivea tectonae urediniospores

A ferrugem da teca, causada pelo fungo Olivea tectonae, foi constatada no estado do Mato Grosso em 2009, no município de Sinop e nos anos seguintes foi observada em outras regiões do estado. A doença causa manchas necróticas nas folhas da planta, que correspondem aos urediniósporos localizados abaixo da epiderme das folhas e, quando em grande intensidade, levam a desfolha precoce da planta. As plantas desfolhadas ficam debilitadas, o que afeta a produção de madeira. Os objetivos deste trabalho foram: (i) avaliar a influência da concentração e do fotoperíodo na germinação de urediniósporos de O. tectonae; (ii) avaliar a influência da temperatura de armazenamento dos urediniósporos, coletados de folhas caídas e de folhas ainda nas plantas, na germinação destes esporos. Os resultados obtidos mostraram que os maiores níveis de germinação foram na concentração de 6,25 x 104 esporos mL-1 exposto à luz constante por 24 horas (92,75%). Porém quando submetidos ao escuro absoluto, houve germinação de 91,31%, o que significa que esporos de O. tectonae podem germinar na presença e na ausência de luz. Verificou-se que a percentagem de germinação foi maior nos esporos coletados de folhas ainda na planta e armazenados a temperatura de -2°C.

The teak rust, caused by the fungi Olivea tectonae, was found for the first time in Mato Grosso in 2009, in Sinop city and in the next years it was observed in another regions of the state. The pathology cause necrotics spots in plant leaves, that correspond to the urediniospores located below the leaves epidermis and, when they occurs in high intensity, lead to premature defoliation of the plant. The defoliated plants get weakened, what affects the wood production. The objectives of this work were: (i) to evaluate the influence of concentration and photoperiod in the germination of O. tectonae; (ii) to evaluate the influence of the storage temperature of urediniospores, collected from fallen leaves and leaves still on the plants, in the spores germination. The results showed that the higher levels of germination were in the concentration of 6,25 x 104 spores mL-1 exposed to constant light for 24 hours (92,75%). However, when they were submitted to total dark, there was also germination of 91,31%, what means that Olivea tectonae's spores can germinate in both the presence and absence of light. The germination percentual was higher in spores collected from leaves still in the plant and stored at a temperature of -2°C.